ሞለኪዩላር ባዮሎጂያዊ የምርምር ዘዴዎች እና አጠቃቀም

ሞለኪዩላር ባዮሎጂያዊ የምርምር ዘዴዎች ዘመናዊ ሕክምና የሚያድረው ሳይንስ, እና በባዮሎጂ ረገድ ወሳኝ ሚና ይጫወታሉ. ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ጥናት ውስጥ እድገት ምስጋና, ሰው ወዘተ አሲዶች, ቅልቅል ውስጥ የተፈለገውን ኑክሊክ አሲድ እውቅና ለማወቅ ከፔል ወኪል ወደ ኦርጋኒክ ያለውን ጂኖም ለመዳሰስ የሚችል ነው

ሞለኪዩላር-ህይወታዊ ዘዴዎች. ይህ ምንድን ነው?

ወደ ሳይንቲስቶች መካከል 70-80s ውስጥ እንድታግዝ የመጀመሪያው ነበረ የሰው ልጆችን ጂኖም. ይህ ክስተት ጀነቲካዊ ምሕንድስና በሞለኪውል ባዮሎጂ ልማት ግፊት ሰጥቶ ነበር. ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ንብረቶች ጥናት ይህ በሽታ ምርመራ, የጥናት ጂን ዓላማ እነዚህን ኑክሊክ አሲዶች ለመጠቀም አሁን የሚቻል ነው ማለቱ ነው.

ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ዝግጅት

ሞለኪዩላር ባዮሎጂያዊ የምርመራ ዘዴዎች ብዙውን ጊዜ ይህንን: ቁሳዊ ጀምሮ ይጠይቃሉ ኑክሊክ አሲድ. ሕይወት ያላቸው ሴሎች እነዚህን ንጥረ ነገሮችን ለመምረጥ በርካታ መንገዶች አሉ. እያንዳንዱ የራሱ ጥቅሞች እና ጉዳቶች አሉት: በጥሩ መልክ ኑክሊክ አሲዶች ማግለል ዘዴ በመምረጥ ጊዜ ከግምት ውስጥ መግባት አለባቸው.

Marmur በ ኤን 1. ዝግጅት. ወደ ዘዴ, የአልኮል ንጥረ ነገሮች ድብልቅ በማከም ረገድ ያካትታል ንጹህ ኤን ምክንያት ይዘንባል. ይህ ዘዴ መክሰስም, ብረትን ንጥረ, phenol እና ክሎሮፎርምን መጠቀም ነው.

በ ቡም ላይ ኤን 2. ማግለል. እዚህ ጥቅም ላይ ነው ዋናው ንጥረ ነገር - guanidine thiocyanate (GuSCN) ነው. የሱን ስለተፈጸመው ያስፋፋል ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ ይህ ተከትለው ልዩ ቋት አማካኝነት ሊሰበሰብ የሚችልበትን ልዩ substrates, ላይ. ይሁን እንጂ GuSCN - በ TCP አንድ አጋቾች ነው, እና ትንሽም ክፍል ኑክሊክ አሲዶች ጋር በመስራት ጊዜ አስፈላጊ ነው ያለውን polymerase ሰንሰለት ምላሽ, ያለውን አካሄድ ተጽዕኖ ሊያሳድር ይችላል ኤን ውስጥ ገቢ ይቀዳል.

ከቆሻሻው 3. ጤዛ. የ ዘዴ ራሳቸው dehoksiribonukleinovoy አሲድ እና ከቆሻሻው ተቀማጭ አይደለም እንደሆነ ሞለኪውሎች ውስጥ ወደ ቀዳሚው ሰዎች ይለያል. ይህንን ለማድረግ, የ አዮን የማስተላለፍ ይጠቀሙ. የ ለኪሳራ ሁሉም ንጥረ እልባት እንደሚችል ነው.

4. ቁርባን የማጣሪያ. የ ኤን ኤ ሞለኪውል አወቃቀር, እና አንዳንድ ስታትስቲክስ ለማግኘት አስፈላጊነት በተመለከተ ትክክለኛ መረጃ አያስፈልጋቸውም ጊዜ በዚህ ዘዴ ጉዳዮች ላይ ውሏል. ምክንያቱ ሳሙናዎችን, በተለይ alkalies አያያዝ ጊዜ ኑክሊክ አሲድ መዋቅር ጉዳት ሊሆን እንደሚችል ነው.

የምርምር ዘዴዎች ምደባ

ምርምር ሁሉ የሞለኪውል-ህይወታዊ ዘዴዎች በሦስት ዋና ዋና ክፍሎች ተከፍለዋል:

(ኢንዛይሞች የሆነ የብዙ ቁጥር በመጠቀም) 1. እንጥልጥሎች. የምርመራ ዘዴዎች በብዙ ረገድ ትልቅ ሚና ይጫወታል ይህም polymerase ሰንሰለት ምላሽ, - ይህ PCR ያካትታል.

2. Neamplifikatsionnye. ዘዴዎች ይህ ቡድን ኑክሊክ አሲድ አትቀላቅል ሥራ ጋር በቀጥታ የተያያዘ ነው. ምሳሌዎች በአርማታ hybridization, ወዘተ ውስጥ, 3 ዓይነቶች እንደሚደመስስልን ናቸው

አንድ የተወሰነ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤስ መጠይቅን ወደ ኃይለኛውን ያለውን መጠይቅን ሞለኪውል, ከ ምልክት እውቅና ላይ የተመሠረተ 3. ዘዴዎች. ምሳሌ - hybridization ስርዓት Hybride አንሳ ስርዓት መፍትሄ (HC2).

የሞለኪውል ባዮሎጂያዊ ምርምር ዘዴዎች ላይ ሊውል የሚችል ኢንዛይሞችን

ብዙ የሞለኪውል የምርመራ ዘዴዎችን ኢንዛይሞች ሰፊ ክልል መጠቀምን ያካትታል. ከታች በጣም ብዙውን ጊዜ ጥቅም ላይ ይውላሉ:

1. ገደብ ኢንዛይም - አስፈላጊውን ክፍሎች ወደ ኤን ኤ ሞለኪውል "መቁረጥ".

2. ኤን polymerase - ድርብ-መሄጃ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ ሞለኪውል synthesizes.

3. ግልብጥ transcriptase (transcriptase መቀልበስ) - ኤን አብነት ከ ኤን synthesize ነበር.

4. ኤን ligase - ኑክሊዮታይድ መካከል phosphodiester ለእስራት ምስረታ ኃላፊነት ነው.

5. exonuclease - የ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ ሞለኪውል መጨረሻ ክፍሎች የመጡ ኑክሊዮታይድ ያስወግደዋል.

PCR - ኤን እንጥልጥሎች መሠረታዊ ዘዴ

Polymerase ሰንሰለት ምላሽ (PCR) በስፋት ዘመናዊ ሞለኪውላር ባዮሎጂ ውሏል. አንድ ነጠላ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውል ቅጂዎች (የድምፅ ማጉያ ሞለኪውል) አንድ ታላቅ ቁጥር ማግኘት ይቻላል ውስጥ ይህን ዘዴ,.

PCR ዋና ዋና ተግባራት:

- በሽታዎች ምርመራ;

-, ጂን ኤን ክፍሎች በክሎኒንግ.

የ polymerase ሰንሰለት ምላሽ የሚከተሉትን ክፍሎች ይጠይቃል ለመፈጸም ዘንድ: የመጀመሪያው የዲ ኤን ኤ ሞለኪውል, አንድ thermostable ኤን polymerase (Taq ወይም Pfu), deoxyribonucleotide የፎስፌት (የናይትሮጂን የመቀመጫዎችን ምንጮች), የ primers (2 primer 1 የዲ ኤን ኤ ሞለኪውል) እና ራሱ መምራት የሚችል አንድ ቋት ስርዓት ሁሉንም ምላሾች.

denaturation, primer annealing እና elongation: PCR ሦስት ደረጃዎች ያካትታል.

1. denaturation. 94-95 ዲግሪ ሴልሲየስ proshodit የሆነ ሙቀት ዲ ኤን ኤ በሁለት ሰንሰለት መካከል ያለውን ሃይድሮጂን ቦንድ እሰብራለሁ, እና በዚህም ምክንያት ሁለት ነጠላ-ያስሱና ሞለኪውሎች ያገኛሉ.

2. annealed primers. ከ50-60 ዲግሪ አንድ ሙቀት ሴንቲግሬድ complementarity ዓይነት መሠረት ነጠላ-መሄጃ ኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች ዳርቻ ላይ accession primers የሚከሰተው.

3. Elongation. 72 ዲግሪ የሆነ ሙቀት ላይ ድርብ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች ተሰብስቦ በተሰራ ሴት ልጅ መሄጃ ነው.

ዲ ኤን ኤ ተከተል

ሞለኪዩላር ባዮሎጂያዊ የምርምር ዘዴዎች ብዙውን ጊዜ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ አንድ ሞለኪውል ውስጥ ኑክሊዮታይድ ያለውን ቅደም ተከተል ዕውቀት ያስፈልጋቸዋል. የ ለማወቅ ጄኔቲክ ኮድ ይረዶቸዋሌ. ወደፊት በሞለኪዩል ምርመራዎችን የሰው ቅደም ተከተል ላይ ውሳኔ ውስጥ አግኝቷል እውቀት ላይ የተመሠረተ ይሆናል.

ተከተል የሚከተሉትን አይነቶች:

• የ Maxam-ጊልበርት በ ተከተል;
• Sanger ተከተል;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe ተከተል.